Diese Technik, die auch als RFLP-Analyse bezeichnet wird, nutzt die Polymorphismen in den genetischen Codes einzelner Menschen aus. Obwohl alle Mitglieder einer Spezies im Wesentlichen die gleiche genetische Ausstattung haben, tragen diese geringen Unterschiede zu Veränderungen des Phänotyps, wie Aussehen oder Metabolismus, zwischen Individuen bei.
RFLP: Analysetechnik und Anwendungen
Die RFLP-Analysetechnik beinhaltet das Schneiden einer bestimmten DNA- Region mit bekannter Variabilität mit Restriktionsenzymen, dann Trennen der DNA-Fragmente durch Agarosegelelektrophorese und Bestimmen der Anzahl der Fragmente und relativen Größen.
Ein Restriktionsenzym ist ein Enzym, ein Proteinmolekül, das DNA an Restriktionsstellen schneidet. Im Wesentlichen wird die DNA-Probe durch die Restriktionsenzyme aufgebrochen und verdaut. Die resultierenden Fragmente werden entsprechend ihrer Länge getrennt und das Muster der Fragmentgrößen wird für jedes einzelne getestete Individuum unterschiedlich sein.
Der vollständige RFLP-Prozess erfordert Sondenmarkierung, DNA-Fragmentierung, Elektrophorese, Blotting, Hybridisierung, Waschen und Autoradiographie. Das detektierte RFLP wird unter Verwendung eines Röntgenfilms in einer Autoradiographie sichtbar gemacht, wobei DNA-Fragmente betrachtet und analysiert werden können, nachdem sie durch Elektrophorese voneinander getrennt wurden.
Einige der Anwendungen für RFLP-Analyse umfassen:
- DNA-Fingerabdruck . Forensische Wissenschaftler können die RFLP-Analyse verwenden, um Verdächtige auf der Basis von Beweismaterial zu identifizieren, das an Szenen von Verbrechen gesammelt wurde.
- Vaterschaft. RFLP wird auch bei der Bestimmung der Vaterschaft oder der Abstammungsverfolgung verwendet.
- Genetische Vielfalt. Die Technik kann zur Untersuchung der Evolution und Migration von Wildtieren, zur Untersuchung von Zuchtmustern in Tierpopulationen und zur Erkennung und Diagnose bestimmter Krankheiten verwendet werden.
Die Technik der Verwendung von RFLP-Detektion von Variation in Genomen ist ein wesentliches Werkzeug bei der Genomkartierung und genetischen Krankheitsanalyse. Wenn der Ort eines bestimmten Krankheitsgens in einem bestimmten Chromosom gesucht wird, dann würden Forscher die DNA von Mitgliedern einer Familie mit der Krankheit analysieren und dann nach ähnlichen Vererbungsmustern in RFLP-Allelen suchen.
Sobald ein Krankheitsgen lokalisiert ist, könnte die Durchführung einer RFLP-Analyse bei anderen Familienmitgliedern einen Träger der mutierten Gene aufdecken oder das gesamte Krankheitsrisiko signalisieren. Es ist wichtig anzumerken, dass die RFLP-Technik derzeit nicht weit verbreitet ist, da neuere, robustere Techniken für die DNA-Analyse in der Forensik und auf verschiedenen anderen Gebieten verwendet werden.
Negativer Aspekt der Analyse
Leider ist die RFLP-Analysetechnik mühsam und langsam. Abgesehen davon, dass eine große Menge an Proben-DNA benötigt wird - die Probe müsste normalerweise etwa die Größe eines Viertels haben, was für DNA-Proben relativ groß ist - kann der Prozess von der Sondenmarkierung bis zum Waschen und der Autoradiographie bis zu einem voller Monat bis zum Abschluss.
Die Ergebnisse des Human Genome Project haben die Notwendigkeit von RFLP weitgehend ersetzt. Das Projekt ermöglichte die Bestimmung der gesamten DNA-Sequenz, die in menschlichen Zellen gefunden wurde, des menschlichen Genoms und zur Identifizierung aller Gene im menschlichen Genom.