Wie man eine Bakterienkultur einfriert (Lyophilisierung)

Die Lyophilisierung oder Gefriertrocknung ist ein kurzes Laborverfahren

Gefriertrocknen, auch Lyophilisierung oder Kryodesikkation genannt, ist der Prozess des Entfernens von Wasser aus einem Produkt, nachdem es gefroren ist (und dann unter Vakuum gesetzt wurde), wodurch Eis von einem Feststoff zu einem Dampf wechseln kann, ohne durch eine flüssige Phase zu gehen. Eis (oder andere gefrorene Lösungsmittel) werden durch Sublimation aus einem Produkt entfernt und gebundene Wassermoleküle werden durch den Desorptionsprozess entfernt.

Die Grundlagen der Lyophilisierung

Eine der besten Möglichkeiten, um eine Bakterien-, Pilz-, Hefe- oder andere Mikroorganismenkultur für lange Zeiträume zu lagern, ist die Verwendung des Gefriertrocknungsverfahrens. Dieses kurze Laborverfahren kann mit jedem handelsüblichen Gefriertrockner durchgeführt werden, der Ihre Kultursammlung bewahrt. Da die Lyophilisierung die komplexeste und teuerste Form des Trocknens ist, ist das Verfahren normalerweise auf empfindliche, wärmeempfindliche Materialien von hohem Wert beschränkt. Substanzen, die nicht durch Gefrieren geschädigt werden, können in der Regel lyophilisiert werden, so dass eine Kühllagerung unnötig ist.

Dieser Prozess kann so wenig wie drei Stunden und bis zu 24 Stunden dauern, ohne die Kulturwachstumszeit zu berücksichtigen.

Der Schritt-für-Schritt-Prozess der Lyophilisierung

1. Zuerst kultiviere man eine Übernachtkultur oder einen Rasen des Mikroorganismus auf LB oder einer anderen geeigneten Nähragarplatte.

2. Als nächstes bereiten Sie sterile Crimp-Kappenfläschchen durch Autoklavieren im Voraus vor, mit den Kappen (Gummistopfen), die lose darauf gelegt werden. Legen Sie vor dem Autoklavieren die Etiketten mit der Kennzeichnung der Kultur in die Röhrchen. Alternativ können Röhrchen mit sterilen Kappen verwendet werden .

1. Füge 4 ml Lyophilisierungspuffer zu der Platte hinzu. Bei Bedarf können die Zellen mit einem sterilen Glasstab suspendiert werden.

2. Übertragen Sie die Kultur Suspension schnell auf die sterilisierten Fläschchen. Fügen Sie ungefähr 1,5 ml pro Fläschchen hinzu. Mit der Gummikappe verschließen.

3. Frieren Sie die Kultur Suspension in den Fläschchen, indem Sie die Fläschchen in einem Gefrierschrank -20 Grad Celcius.

1. Sobald die Kulturen gefroren sind, bereiten Sie den Gefriertrockner vor, indem Sie ihn einschalten und Zeit für die Stabilisierung der entsprechenden Temperatur- und Vakuumbedingungen lassen. Befolgen Sie die Anweisungen des Herstellers für die von Ihnen verwendete Gefriertrocknertype.

2. Setzen Sie die Fläschchenkappen vorsichtig und aseptisch auf die Fläschchen, so dass während des Gefriertrocknungsprozesses Feuchtigkeit entweichen kann, und platzieren Sie die Fläschchen in einer Gefriertrocknungskammer. Bringen Sie das Vakuum gemäß den Herstelleranweisungen in die Kammer ein.

3. Lassen Sie die Kulturzeit vollständig lyophilisieren (austrocknen). Dies kann einige Stunden bis über Nacht dauern, abhängig vom Volumen jeder Probe und wie viele Proben Sie haben.

4. Entnehmen Sie die Proben gemäß den Anweisungen des Herstellers aus der Gefriertrocknungskammer und versiegeln Sie die Durchstechflaschen sofort mit den Gummikappen und den Bördelkappen.

5. Bewahren Sie die lyophilisierte Kultursammlung bei Raumtemperatur auf.

Produkte, die Sie brauchen

• Gefriertrockner
• Nährstoff oder andere geeignete Agarplatten (und Inkubator zum Züchten der Kultur)
• Glasstab
• Lyophilisierungspuffer
• Crimp-Top-Fläschchen mit Gummistopfen (und eine Crimper zum Anbringen der Kappen)
• Gefrierschrank

<sub>Referenz:

SP Wissenschaftlich. Grundlagen der Gefriertrocknung. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>