Wie man diesen immunhistochemischen Färbepuffer herstellt
Phosphatgepufferte Salzlösung (PBS) ist eine Pufferlösung, die häufig für die immunhistochemische Färbung (IHC) verwendet wird und häufig in der biologischen Forschung verwendet wird. PBS ist eine Salzlösung auf Wasserbasis, die Natriumhydrogenphosphat, Natriumchlorid und in einigen Fällen Kaliumchlorid und Kaliumdihydrogenphosphat enthält.
Immunhistochemische Färbung
Immunhistochemie bezieht sich auf den Prozess des Nachweises von Antigenen wie Proteinen in den Zellen eines Gewebeschnitts unter Verwendung des Prinzips von Antikörpern, die spezifisch an Antigene in biologischen Geweben binden.
Immunfluoreszenzfärbung war die erste immunhistochemische Färbemethode.
Antigene werden sichtbar, wenn sie unter Verwendung von Fluoreszenzfarbstoffen aufgrund einer Antigen-Antikörper-Bindungsreaktion mit Antikörpern konjugiert werden. Dieser Prozess findet statt, wenn er durch Anregung von Licht einer spezifischen Wellenlänge unter einem Fluoreszenzmikroskop aktiviert wird.
Die Osmolaritäts- und Ionenkonzentrationen der Lösungen stimmen mit denen des menschlichen Körpers überein - sie sind isotonisch.
Ein Rezept für PBS
Sie können PBS auf verschiedene Arten vorbereiten. Es gibt mehrere Formeln. Einige von ihnen enthalten kein Kalium, andere enthalten Kalzium oder Magnesium .
Dieses Rezept ist relativ einfach. Es ist für 10X PBS-Stammlösung (0,1M). Sie können jedoch auch eine 1X-Stammlösung erstellen oder mit diesem 10X-Rezept beginnen und es auf 1X verdünnen.
Der gesamte Vorgang dauert etwa 10 Minuten.
Eine Option zum Hinzufügen von Tween ist ebenfalls verfügbar.
Was Sie PBS Puffer machen müssen
- Monobasisches Natriumphosphat (wasserfrei)
- Natriumphosphat zweibasig (wasserfrei)
- Natriumchlorid
- Wiegen und Wiegen von Booten
- Magnetrührer und Rührstab
- Eine pH-Sonde, die kalibriert ist und geeignete Lösungen für die pH-Einstellung
- 1L-Messkolben
- Tween 20 (optional)
Wie man phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) herstellt
Wiege 10,9 g wasserfreies Natriumphosphat (Na 2 HPO 4), 3,2 g wasserfreies Natriumphosphat (NaH 2 PO 4) und 90 g Natriumchlorid (NaCl).
In knapp 1 l destilliertem Wasser auflösen.
Stelle den pH-Wert auf 7,4 ein und stelle die Lösung auf ein Endvolumen von 1 l auf.
Verdünnen Sie 10X vor Gebrauch und justieren Sie den pH falls notwendig neu.
Sie können eine PBS-Lösung, die 0,5% Tween 20 enthält, durch Zugabe von 5 ml Tween 20 zu der 1 l-Lösung herstellen.
Tipps zur Herstellung von PBS-Puffer
Bewahren Sie den Puffer bei Raumtemperatur auf, nachdem Sie die PBS-Lösung hergestellt haben.
Nicht wasserfreie Reagenzien können ersetzt werden, aber Sie müssen die entsprechende Masse von jedem neu berechnen, um die hinzugefügten Wassermoleküle unterzubringen.
Verwendung von phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS)
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung hat viele Verwendungsmöglichkeiten, da sie für die meisten Zellen isotonisch und nicht toxisch ist. Es kann verwendet werden, um Substanzen zu verdünnen, und es wird oft verwendet, um Behälter von Zellen zu spülen. PBS kann als Verdünnungsmittel in verschiedenen Verfahren zum Trocknen von Biomolekülen verwendet werden, da die darin enthaltenen Wassermoleküle beispielsweise um das Substanzprotein herum strukturiert sind. Es wird "getrocknet" und auf einer festen Oberfläche immobilisiert.
Der pH-Wert bleibt konstant und konstant, um die Zerstörung der Zellen zu verhindern.
Der dünne Wasserfilm, der an die Substanz bindet, verhindert Denaturierung oder andere Konformationsänderungen. Carbonatpuffer können für den gleichen Zweck verwendet werden, jedoch mit weniger Wirksamkeit.
PBS kann auch verwendet werden, um ein Referenzspektrum zu nehmen, wenn die Proteinadsorption in der Ellipsometrie gemessen wird.