Dieser Puffer wird verwendet, um die DNA-Bewegung zu untersuchen
Dieser Puffer hat eine niedrige Ionenstärke und eine geringe Pufferkapazität. Es ist am besten für die Elektrophorese von großen (> 20 kb) DNA-Stücken geeignet und muss häufig ersetzt oder für längere (> 4 h) Gel-Laufzeiten rezirkuliert werden.
In diesem Sinne möchten Sie möglicherweise mehrere Batches berücksichtigen.
Angesichts der Tatsache, dass der Puffer einfach herzustellen ist und die Schritte schnell ausgeführt werden können, sollte es nicht besonders zeitaufwendig oder schwierig sein, mehr als eine Charge gleichzeitig herzustellen. Mit den folgenden Anweisungen dauert es nur 30 Minuten, um den TAE-Puffer zu erstellen. Hier ist wie:
Bereiten Sie eine Stammlösung von EDTA vor
Eine EDTA (Ethylendiamintetraessigsäure) -Lösung wird im Voraus hergestellt. EDTA wird nicht vollständig in eine Lösung gehen, bis der pH auf etwa 8,0 eingestellt ist. Für eine 500-Milliliter-Stammlösung von 0,5 M EDTA werden 93,05 Gramm EDTA-Dinatriumsalz (FW = 372,2) ausgewogen. Lösen Sie in 400-Milliliter entionisiertem Wasser auf und stellen Sie den pH-Wert mit Natriumhydroxid (NaOH) ein. Füllen Sie die Lösung auf ein Endvolumen von 500 Millilitern auf.
Eine Aktienlösung von TAE aufpeitschen
Machen Sie eine konzentrierte (50x) Vorratslösung von TAE durch Auswiegen von 242 Gramm Tris-Base (FW = 121,14) und Auflösen in ungefähr 750 Milliliter entionisiertem Wasser.
Füge vorsichtig 57,1 Milliliter Eisessig und 100 Milliliter 0,5 M EDTA (pH 8,0) hinzu. Danach die Lösung auf ein Endvolumen von 1 Liter einstellen. Diese Stammlösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden. Der pH-Wert dieses Puffers ist nicht eingestellt und sollte etwa 8,5 betragen.
Bereiten Sie eine Arbeitslösung von TAE vor
Die Arbeitslösung von 1x TAE-Puffer wird durch einfaches Verdünnen der Stammlösung um das 50-fache in deionisiertem Wasser hergestellt.
Die gelösten Endkonzentrationen betragen 40 mM. Tris-Acetat und 1 mM EDTA. Der Puffer ist nun bereit für den Gebrauch eines Agarosegels.
Was Sie für den Puffer benötigen
Da die Erstellung des TAE-Puffers nur eine schnelle und einfache Zusammenstellung von Anweisungen erfordert, ist die Anzahl der dafür benötigten Materialien nicht übermäßig hoch. Sie brauchen nur EDTA-Dinatriumsalz, Tris-Base und Eisessig.
Für die Herstellung des Puffers sind je nach Bedarf auch ein pH-Meter und Kalibrierungsstandards erforderlich. Sie werden auch 600 Milliliter und 1500 Milliliter Becher oder Flaschen sowie Messzylinder benötigen. Schließlich benötigen Sie entionisiertes Wasser, Rührstäbchen und Rührbleche.
Aufwickeln
Wo planen Sie, den Puffer zu schaffen - auf einem Schulgelände, einer Baustelle oder an einem anderen Ort wie Ihrem Zuhause? Überprüfen Sie das Inventar, bevor Sie beginnen, um sicherzustellen, dass Sie alle oben genannten Materialien für den TAE-Puffer haben.
Wenn Sie nicht für Materialien bezahlen möchten, empfiehlt es sich, den Puffer außerhalb Ihres Hauses zu verwenden. Sie können die Materialien, die Sie benötigen, einfach online bestellen oder einen Fachhandel für sie besuchen.