Wie man TBE-Puffer in 3 einfachen Schritten macht

Dieser Puffer wird zur Elektrophorese-Trennung von DNA verwendet

TBE-Puffer ist eine Pufferlösung, die aus Tris-Base, Borsäure und EDTA (oder insgesamt Tris-Borat-EDTA) besteht. Dieser Puffer wird oft für die Agarosegelelektrophorese bei der Analyse von DNA-Produkten verwendet, die aus PCR- Amplifikation, DNA-Reinigungsprotokollen oder DNA-Klonierungsexperimenten resultieren.

TBE-Puffer ist besonders nützlich für die Trennung von kleineren DNA-Fragmenten (MW <1000), wie kleine Produkte von Restriktionsenzymverdauungen .

TBE hat eine größere Pufferkapazität und liefert eine schärfere Auflösung als TAE-Puffer . TAE-Puffer ist eine Lösung aus Tris-Base, Essigsäure und EDTA (Tris-Acetat-EDTA).

FSME ist im Allgemeinen teurer als TAE und hemmt die DNA-Ligase, was zu Problemen führen kann, wenn nachfolgende DNA-Reinigungs- und Ligationsschritte beabsichtigt sind. In den folgenden drei einfachen Schritten lernen Sie, wie Sie den TBE-Puffer erstellen. Es sollte nicht länger als etwa 30 Minuten dauern, um diesen Puffer zu erstellen. Hier ist wie:

Bereiten Sie eine Stammlösung von EDTA vor

Eine EDTA (Ethylendiamintetraessigsäure) -Lösung sollte im Voraus vorbereitet werden. EDTA wird nicht vollständig in Lösung gehen, bis der pH-Wert auf etwa 8,0 eingestellt ist. Für eine 500-Milliliter-Stammlösung von 0,5 M EDTA werden 93,05 Gramm EDTA-Dinatriumsalz (FW = 372,2) ausgewogen. Dann löse man es in 400 Milliliter entionisiertem Wasser auf und stelle den pH-Wert mit NaOH ein. Danach wird die Lösung auf ein Endvolumen von 500 Millilitern aufgefüllt.

Bereiten Sie eine Stammlösung von TBE vor

Machen Sie eine konzentrierte (5x) Stammlösung von TBE, indem Sie 54 g Tris-Base (FW = 121,14) und 27,5 g Borsäure (FW = 61,83) wiegen und beide in ungefähr 900 ml entionisiertem Wasser lösen. Dann füge 20 Milliliter 0,5 M EDTA (pH 8,0) hinzu und stelle die Lösung auf ein Endvolumen von 1 Liter ein.

Diese Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden, in älteren Lösungen bildet sich jedoch ein Niederschlag. Bewahren Sie den Puffer in Glasflaschen und verwerfen, wenn ein Niederschlag gebildet hat.

Bereiten Sie eine Arbeitslösung von TBE vor

Für die Agarosegelelektrophorese kann ein TBE-Puffer in einer Konzentration von 0,5 × (1: 10-Verdünnung des konzentrierten Stammes) verwendet werden. Verdünnen Sie die Stammlösung um das 10-fache in entionisiertem Wasser. Die endgültigen gelösten Konzentrationen sind 45 mM Tris-Borat und 1 mM EDTA. Der Puffer ist nun bereit für den Gebrauch eines Agarosegels .

Was du brauchst

Um TBE-Puffer zu machen, benötigen Sie nur vier Substanzen. Die restlichen Punkte auf dieser Liste sind Ausrüstung. Die vier benötigten Substanzen sind EDTA-Dinatriumsalz, Tris-Base, Borsäure und deionisiertes Wasser.

Für die Ausrüstung benötigen Sie je nach Bedarf ein pH-Meter und Kalibrierungsstandards. Darüber hinaus benötigen Sie 600-Milliliter- und 1500-Milliliter-Becher oder -Kolben. Abgerundet werden Ihre Gerätebedürfnisse durch Messzylinder und Rührstäbe sowie Rührbleche.

Überprüfen Sie das Inventar in dem Labor, das Sie verwenden werden, um sicherzustellen, dass Sie alles haben, was Sie brauchen, bevor Sie beginnen. Nichts ist schlimmer, als mitten in der Vorbereitung einer Lösung stehen zu müssen, weil dir die richtigen Materialien ausgehen.

Wenn Ihr Labor in der Schule oder auf Ihrer Baustelle ist, erkundigen Sie sich beim zuständigen Personal, ob alle Artikel im Lager sind. Dadurch sparen Sie am Ende Zeit und Energie.